7º Semana

Se volvieron a repicar las cepas no crecidas de la semana pasada para su conservación, sin embargo el noventa porciento de las cepas repicadas tuvieron un crecimiento exitoso ya que fue puro y abundante.
Se realizó una PCR utilizando ADN de hongos levaduriformes previamente extraidos. Se amplificaron 4 cepas con el Primer 1281 (at-random) descripto para estos hongos. Se realizó por duplicado con 2 Taq para probar la sensibilidad de las mismas (Taq y GoTaq).
El protocolo de amplificación para la utilización del PCR es el que se detalla a continuación:
1: 94ºC (5 minutos)
2: 94ºC (30 segundos)
3: 36ºC (30 segundos)
4: 72ºC (1 minuto)
5: 36 ciclos
6: 72ºC (10 minutos)

6º Semana

Repicamos cepas de hongos para su correcta conservación.
Nos familiarizamos con el protocolo de PCR y definimos las estrategias a seguir para la semana que viene. Realizamos los cálculos para saber cuánto reactivo hay que poner de cada DNA en estudio.
Protocolo:
http://www.promega.com/paguide/chap1.htm#title6
Observamos la electroforesis realizada la semana pasada con luz ultravioleta, tuvo resultados satisfactorios demostrando que la extracción fue realizada como es debido.
Breve clase teórica de PCR.

5º Semana

Observamos las muestras sembradas la semana anterior.
Hoy preparamos una muestra buffer a partir de TBE 5X y lo diluimos a 1X. Luego pesamos 0.4g de agarosa y lo llevamos a 50ml con el buffer antes preparado para hacer una corrida electroforética. Lo calentamos hasta que se disolvió toda la agarosa. Lo dejamos enfriar a 37ºC aproximadamente, lo colocamos en la bandeja, pusimos los peines, dejándolo solidificar.
Luego sembramos muestras de ADN de hongos levaduriformes extraidos de pacientes (hemocultivos y nutricion parenteral) en los pocillos del gel de agarosa para empezar la electroforesis y observar. Esto fue realizado para poder apreciar las bandas, y de esa forma verificar si la extraccion del ADN fue correcta.

4º Semana

Repicamos cepas en chromagar para la identificación de levaduras.
Búsqueda y observación de estructuras fúngicas en materiales clínicos (escamas).

Observación:
No pudimos terminar con el plan del día debido a una evacuación del edificio por causa de una alarma de incendio.

3º Semana

Hoy repicamos muestras de infecciones fúngicas de pacientes, debido a que los medios estaban casi agotados y secos. Se repicaron en medio de agar Sabouroud para la correcta conservación de las mismas. Despues los pusimos a incubar en la estufa.
Luego nos tomamos una muestra de exudado de fauces (ver video). Se sembró la muestra tomada en un medio de agar Sabouroud para observar su crecimiento.
A partir de unas escamas extraidas de pacientes tomamos una muestra, las digerimos con hidróxido de potasio al 40% y las observamos al microscopio para averiguar si tenían una infección fúngica (ver video).
Tomamos fotos a lo largo de la jornada para mostrar la infraestructura del lugar.

Fotos del establecimiento donde trabajamos:




Procedimiento para saber si una enfermedad proviene de los hongos:



Exudado de fauces:

2º Semana

Repaso Introducción Fúngica.
Clase teórica sobre Micopatología y Epidemiología. Concepto de PCR y RAPD.
Redactamos un resumen con los conceptos aprendidos hasta el momento.
Sembramos dos muestras de distintos tipos de hongos en dos medios de cultivo diferentes, para la semana que viene poder apreciar su crecimiento.
También aplicamos el método de la tinta china para poder observar al hongo Levaduriforme con su cápsula.

1º Semana

Reconocimiento del lugar.
Presentacion del proyecto.
Introduccion global a la biologia fungica.
Disociamos una muestra de hongos en un portaobjetos para poder visualizarla en el microscopio.
Vimos diferentes tipos de estructuras de hongos.