Se volvieron a repicar las cepas no crecidas de la semana pasada para su conservación, sin embargo el noventa porciento de las cepas repicadas tuvieron un crecimiento exitoso ya que fue puro y abundante.
Se realizó una PCR utilizando ADN de hongos levaduriformes previamente extraidos. Se amplificaron 4 cepas con el Primer 1281 (at-random) descripto para estos hongos. Se realizó por duplicado con 2 Taq para probar la sensibilidad de las mismas (Taq y GoTaq).
El protocolo de amplificación para la utilización del PCR es el que se detalla a continuación:
1: 94ºC (5 minutos)
2: 94ºC (30 segundos)
3: 36ºC (30 segundos)
4: 72ºC (1 minuto)
5: 36 ciclos
6: 72ºC (10 minutos)
jueves, 25 de junio de 2009
jueves, 18 de junio de 2009
6º Semana
Repicamos cepas de hongos para su correcta conservación.
Nos familiarizamos con el protocolo de PCR y definimos las estrategias a seguir para la semana que viene. Realizamos los cálculos para saber cuánto reactivo hay que poner de cada DNA en estudio.
Protocolo:
http://www.promega.com/paguide/chap1.htm#title6
Observamos la electroforesis realizada la semana pasada con luz ultravioleta, tuvo resultados satisfactorios demostrando que la extracción fue realizada como es debido.
Breve clase teórica de PCR.
Nos familiarizamos con el protocolo de PCR y definimos las estrategias a seguir para la semana que viene. Realizamos los cálculos para saber cuánto reactivo hay que poner de cada DNA en estudio.
Protocolo:
http://www.promega.com/paguide/chap1.htm#title6
Observamos la electroforesis realizada la semana pasada con luz ultravioleta, tuvo resultados satisfactorios demostrando que la extracción fue realizada como es debido.
Breve clase teórica de PCR.
jueves, 11 de junio de 2009
5º Semana
Observamos las muestras sembradas la semana anterior.
Hoy preparamos una muestra buffer a partir de TBE 5X y lo diluimos a 1X. Luego pesamos 0.4g de agarosa y lo llevamos a 50ml con el buffer antes preparado para hacer una corrida electroforética. Lo calentamos hasta que se disolvió toda la agarosa. Lo dejamos enfriar a 37ºC aproximadamente, lo colocamos en la bandeja, pusimos los peines, dejándolo solidificar.
Luego sembramos muestras de ADN de hongos levaduriformes extraidos de pacientes (hemocultivos y nutricion parenteral) en los pocillos del gel de agarosa para empezar la electroforesis y observar. Esto fue realizado para poder apreciar las bandas, y de esa forma verificar si la extraccion del ADN fue correcta.
Hoy preparamos una muestra buffer a partir de TBE 5X y lo diluimos a 1X. Luego pesamos 0.4g de agarosa y lo llevamos a 50ml con el buffer antes preparado para hacer una corrida electroforética. Lo calentamos hasta que se disolvió toda la agarosa. Lo dejamos enfriar a 37ºC aproximadamente, lo colocamos en la bandeja, pusimos los peines, dejándolo solidificar.
Luego sembramos muestras de ADN de hongos levaduriformes extraidos de pacientes (hemocultivos y nutricion parenteral) en los pocillos del gel de agarosa para empezar la electroforesis y observar. Esto fue realizado para poder apreciar las bandas, y de esa forma verificar si la extraccion del ADN fue correcta.
domingo, 7 de junio de 2009
4º Semana
Repicamos cepas en chromagar para la identificación de levaduras.
Búsqueda y observación de estructuras fúngicas en materiales clínicos (escamas).
Observación:
No pudimos terminar con el plan del día debido a una evacuación del edificio por causa de una alarma de incendio.
Búsqueda y observación de estructuras fúngicas en materiales clínicos (escamas).
Observación:
No pudimos terminar con el plan del día debido a una evacuación del edificio por causa de una alarma de incendio.
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