15º Semana

Con el protocolo descripto para cryptococo neoformans no hubo amplificación positiva, con lo cual se decidió probar otro primer at-random (Primer 1281), descripto para la amplificación, de cándia alvicans. Dada la escasa literatura que aporte alguna información para la genotipicación de las cándidas guillermondi que estamos estudiando.
Hoy probamos realizar amplificación at-random con otro protocolo para cándidas guillermondi:
Las proporciones fueron (para cada tubo):
-Agua: 41,65 microL
-Buffer: 5 microL
-Cloruro de Magnesio: 1 microL
-dNTPs: 1 microL
-Primer: 0,1 microL
-Taq DNA Pol.: 0,25 microL
-ADN: 1 microL

Las muestras fueron amplificadas en el termociclador bajo los siguientes ciclos:
Completar:
1- 95ºC 120 segundos (Pre-heating)
2- 95ºC 40 segundos (desnaturalización)
3- 50ºC 40 segundos (annealing)
4- 72ºC 59 segundos (extensión)
5- 72ºC 5 minutos (extensión final)

30 ciclos 2, 3 y 4.